?全自動數字 PCR 儀在我國屬于第三類醫療器械注冊產品，且不在免于醫療器械臨床試驗目錄之內。該產品基于數字PCR 檢測原理，與適配試劑配合使用，在臨床上用于對來源于人體樣本中的DNA進行定性和定量檢測。本文為大家介紹全自動數字PCR儀臨床試驗設計實例，一起看正文。
全自動數字 PCR 儀在我國屬于第三類醫療器械注冊產品，且不在免于醫療器械臨床試驗目錄之內。該產品基于數字PCR 檢測原理，與適配試劑配合使用，在臨床上用于對來源于人體樣本中的DNA進行定性和定量檢測。本文為大家介紹全自動數字PCR儀臨床試驗設計實例，一起看正文。
一、全自動數字PCR儀產品工作原理
本產品與配套的微流控芯片配合使用，工作原理包括芯片
上樣、液滴生成、核酸擴增、液滴檢測、廢料轉移等環節。
芯片上樣：操作軟件，將芯片進樣倉彈出，把含有待測樣
本的反應體系的芯片放入后，關閉進樣倉，芯片將由調度系統
掃描和識別，完成芯片上樣。在實驗啟動后，儀器會不斷將進
樣倉上的芯片取走，進入后續流程。只要進樣倉有空位，就可
以隨時加入新的芯片。
液滴生成：芯片由調度系統抓取到生成模塊進行液滴生成操作。生成模塊在氣路的作用下將芯片中的反應體系和微液滴
生成油驅動進入芯片內的液滴生成結構，在流體張力和剪切力
作用下，反應體系周期斷裂，生成尺寸均一的液滴。生成的液
滴儲存在芯片的反應管中。
核酸擴增：完成液滴生成后，調度系統將芯片進行翻轉，
并放入 PCR 模塊中進行 PCR 溫度循環。PCR 模塊按照設定的
程序，對位于芯片反應管中的液滴進行溫度循環控制，使得液
滴內的靶基因在 PCR 反應下不斷實現核酸擴增。
液滴檢測：擴增完的芯片由調度系統轉移到檢測模塊。檢
測模塊內依次向芯片上的每個樣本注入檢測油。在檢測油的驅
動下，反應管內的液滴重新進入芯片管道。在驅動油的和芯片
管道的作用下，液滴形成有序的液滴隊列，依次經過檢測區，在檢測區對依次經過的每一個液滴進行熒光激發。每個液滴中
的熒光染料經激光照射后發射出特定波長的熒光。激發的熒光
被分到不同的光電信號轉換傳感器，光信號轉換成電信號，傳
給上位機系統并繪制成熒光散點圖。軟件依據液滴信號劃分陰
陽性，并通過數學模型精準計算出樣本中模板的拷貝數，通過
儀器配備的觸摸屏呈現給用戶。
廢料轉移：芯片檢測完成后被轉移到廢料倉。在所有處理的過程中，芯片始終保持密封狀態，樣本的泄漏污染風險低。
廢料箱可通過儀器面板打開，將廢料清空后放回儀器。
二、全自動數字PCR儀臨床試驗設計實例
本次臨床試驗在五家臨床試驗機構進行。臨床試驗選擇兩個具有代表性的項目驗證申報產品針對來源于人體樣本中的
DNA定性和定量檢測的臨床性能，所選項目為：人類腫瘤基因
EGFR 基因突變檢測項目和乙型肝炎病毒DNA定量檢測項目。
針對人類腫瘤基因EGFR基因突變檢測項目，臨床試驗納入非小細胞肺癌患者的血漿樣本。采用申報產品與配套的已定型的EGFR 突變檢測試劑作為考核儀器系統，采用已上市的全自動熒光PCR分析儀與配套的已上市EGFR突變檢測試劑作為
對照儀器系統，采用高通量測序方法（NGS）與配套的EGFR突變檢測試劑作為臨床參考系統。該試驗共納入518 例血漿樣
本，陽性樣本 253 例（覆蓋點突變、插入和缺失等各種變異類型，且每種變異類型均有一定的陽性例數），陰性樣本 265 例。試驗結果顯示：考核儀器系統與臨床參考系統比較的陽性符合
率為 96.8%（95%CI：93.9%，98.6%），陰性符合率為 99.3%
（95%CI：97.3%，99.9%），對照儀器系統與臨床參考系統比
較的陽性符合率為 89.7%（95%CI：83.5%，91.9%），陰性符
合率為 98.9%（95%CI：96.7%，99.8%），考核儀器系統檢測性能優于對照儀器系統。
針對乙型肝炎病毒DNA 定量檢測項目，臨床試驗納入乙型肝炎病毒感染患者的血漿樣本。采用申報產品與配套的已定型
乙型肝炎病毒DNA檢測試劑作為考核儀器系統，采用臨床試驗機構自建的數字PCR儀及其配套試劑作為臨床參考系統。該試驗共納入 354 例血漿樣本。定量統計分析結果顯示：考核儀器系統與臨床參考系統的相關系數為0.986，回歸方程為 y=1.068x
-0.125，BA分析的一致性界限在臨床可接受標準內。定性統計
分析結果顯示：考核儀器系統與臨床參考系統的陽性符合率為100%，陰性符合率為100%，總符合率100%。
綜上所述，該產品臨床試驗設計符合《醫療器械臨床評價技術指導原則》的相關要求，臨床性能滿足技術審評要求。
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